Multiplex primers employment for detection of rinderpest virus RNA by PCR

Abstract

Given the high contagiousness and rapid spread of the rinderpest virus, timely and accurate diagnosis plays a key role in preventing epidemics and taking measures to control the disease. The study aims to evaluate the efficiency of using multiplex primers in the polymerase chain reaction method for the detection of rinderpest virus ribonucleic acid. The study included the analysis of samples such as blood serum and conjunctival swabs from 50 animals with clinical manifestations of the disease. The experiment involved the collection of clinical samples such as blood serum and conjunctival washings. The results demonstrate the high specificity of the developed primers. These primers stand out because they use two pairs of the same gene region with different variable sequences that are specific for all strains of the rinderpest virus. In the polymerase chain reaction, both pairs of primers are used simultaneously at equal concentrations and under the same conditions. An additional polymerase chain reaction performed using these primers at the optimal annealing temperature confirmed the successful amplification and specificity of the primers. The absence of dimers and nonspecific products in the negative control confirmed the purity and reliability of the results. Thus, these results demonstrate that the use of these multiplex polymerase chain reaction primers allows for the efficient detection of the ribonucleic acid of the rinderpest virus of different strains. The developed multiplex primers represent an innovative method for the diagnosis of rinderpest virus with the potential for use in veterinary practice and animal disease control.

З урахуванням високої контагіозності та швидкого поширення вірусу чуми м'ясоїдних, своєчасна та точна діагностика відіграє ключову роль у запобіганні епідеміям та вжиття заходів щодо контролю за захворюванням. Мета дослідження – провести оцінку ефективності використання мультиплексних праймерів у методі полімеразної ланцюгової реакції для виявлення рибонуклеїнової кислоти вірусу чуми м'ясоїдних. Дослідження включало аналіз зразків, таких як сироватка крові і змив з кон'юнктиви очей у 50 тварин з клінічними проявами захворювання. В рамках експерименту проводився збір клінічних зразків, таких як сироватка крові та змив з кон'юнктиви очей. Отримані результати демонструють високу специфічність розроблених праймерів. Ці праймери виділяються тим, що вони використовують дві пари однієї й тієї ж ділянки гена з різними варіабельними послідовностями, які є специфічними для всіх штамів вірусу чуми м'ясоїдних. У процесі полімеразної ланцюгової реакції обидві пари праймерів застосовуються одночасно за рівних концентрацій та однакових умов. Додаткова полімеразна ланцюгова реакція, проведена з використанням цих праймерів при оптимальній температурі відпалу, підтвердила успішну ампліфікацію та специфічність праймерів. Відсутність димерів та неспецифічних продуктів у негативному контролі підтверджує чистоту та надійність отриманих результатів. Таким чином, дані результати переконують у тому, що використання цих мультиплексних праймерів полімеразної ланцюгової реакції дозволяє ефективно виявляти рибонуклеїнову кислоту вірусу чуми м'ясоїдних різних штамів. Розроблені мультиплексні праймери представляють інноваційний метод для діагностики вірусу чуми м'ясоїдних з потенціалом для застосування у ветеринарній практиці та контролю захворювань тварин.