Technologies of suspension cultivation in bioreactor of the Chlamydophila abortus strain on McCoy cell culture

Abstract

The purpose of the study was to investigate the cultural method of the diagnosis of Chlamydophila abortus. For this purpose, laboratory diagnosis of pathological material from the farm was carried out at the LLP Research and Production Enterprise «Antigen», where, based on the data of anamnesis, data of occurrence of similar epizootic picture for the last two years, examination and diagnostic manipulations (clinical symptoms, autopsy data, epizootological anamnesis), the preliminary diagnosis «Enzootic abortion of ewes caused by Chlamydophila abortus» was made. Samples from the organs of aborted foetuses and swabs with vaginal contents were taken to confirm this diagnosis. Complement fixation tests with chlamydia antigen were found to be positive in 7 (23%) of the 30 animals that were examined. To isolate the pathogen, the technology of suspension cultivation in a bioreactor of the Chlamydophila abortus strain on McCoy cell culture was used. Isolated pathological material was grown in McCoy cell cultures that were suspended in a bioreactor in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) nutrient medium with 10% foetal bovine serum and antibiotics at a concentration of 2×105 cells/mL. Enzyme immunoassay was a confirmation of the successful result of cultivation. Enzyme immunoassay confirmed the presence of the pathogen in 60.9% of cases. 25 samples were received, which were positive. Thus, the accuracy of the cultural diagnostic method turned out to be almost 3 times higher than the serological diagnostic method. Serological examination revealed 23% presence of Chlamydophila abortus in the samples, and the cultural diagnostic method revealed 60.9%. Unfortunately, in practice, the use of the cultural diagnostic method is associated with a time-delayed result, which is a disadvantage of this diagnostic method compared to the use of polymerase chain reaction.

Метою дослідження було вивчення культурального методу діагностики Chlamydophila abortus. Для цього на базі ТОО Науково-виробничого підприємства «Антиген» проводилася лабораторна діагностика патологічного матеріалу з ферми, де, ґрунтуючись на даних анамнезу, даних виникнення подібної епізоотичної картини за останні два роки, огляду та діагностичних маніпуляцій (клінічні симптоми, дані розтину, епізоотологічний анамнез), було поставлено попередній діагноз «Ензоотичний аборт овець, спричинений Chlamydophila abortus». Для підтвердження цього діагнозу було відібрано проби з органів плодів, що абортувалися, тампони з вагінальним вмістом. Тести на фіксацію комплементу хламідійним антигеном виявилися позитивними у 7 (23 %) із 30 тварин, які були обстежені. Для виділення патогена використовувалася технологія суспензійного культивування в біореакторі штаму Chlamydophila abortus на культурі клітин McCoy. Ізольований патологічний матеріал вирощували в культурі клітин Маккоя, які суспендували в біореакторі в поживному середовище Ігла в модифікації Дульбекко (DMEM) з 10 % фетальною бичачою сироваткою та антибіотиками в концентрації 2×105 клітини/мл. Підтвердженням успішного результату культивування був імуноферментний аналіз. Імуноферментний аналіз підтвердив наявність патогена в 60,9 % випадків. Було отримано 25 зразків, які отримали позитивний результат. Таким чином точність культурального методу діагностики виявилася вищою майже в 3 рази порівняно із серологічним методом діагностики. Серологічне дослідження виявило 23 % наявності Chlamydophila abortus у пробах, а культуральний метод діагностики виявив 60,9%. На жаль, на практиці використання культурального методу діагностики пов'язане з розтягнутим у часі результатом, що є недоліком цього способу діагностики порівняно з використанням полімеразної ланцюгової реакції.